Logo: to the web site of Uppsala University

Vitamin D:s aktiva form, 1,25D3 (1,25-dihydroxivitamin D3), är viktig för bland annat reglering av ben- och mineralmetabolismen i kroppen. Idag finns det många studier som indikerar att brist på vitamin D leder till olika komplikationer såsom kardiovaskulära och metabola sjukdomar. Det finns många olika cytokrom P-450-enzymer (CYP) som är inblandade i omvandlingen och regleringen av vitamin D. Ett viktigt enzym är CYP24A1 som kan både omvandla och reglera mängden av 1,25D3 genom att den katalyserar omvandlingen av 1,25D3 till 1,24,25D3 (1,24,25-trihydroxivitamin D3) via hydroxylering vid C-24.

Man tror att 1,25D3 har en hämmande effekt vid ER-stress under vissa förhållanden och av den anledningen syftade denna studie till att undersöka och analysera vad 1,25D3 har för roll vid ER-stress i prostatacancerceller (PC3-celler). Dessutom undersöktes och bestämdes en koncentration av tunicamycin och en inkubationstid som användes för att inducera ER-stress. I detta projekt användes metoden qPCR (kvantitativ polymeraskedjereaktion) för att analysera nivåer av CYP24A1 mRNA och BiP (Bindande immunoglobulinprotein) mRNA som är en markör för ER-stress. Sedan användes Ct värden som erhölls från qPCR användes i delta-delta metoden för att beräkna det relativa genuttrycket i målproverna (CYP24A1 och BiP) och referensproverna (etanol och dimetylsulfoxid), med hjälp av en referensgen som var beta- aktin.

När cellerna enbart behandlades med 1 µM 1,25D3 i 24 timmar resulterade 1,25D3 behandling i att det var 5 gånger större CYP24A1 mRNA expression i dem behandlade cellerna jämfört med kontrollen etanol (0,1 % v/v). Därefter undersöktes flera koncentrationer av tunicamycin och inkubationstider för att inducera ER-stress vilket resulterade i att ju högre koncentration och inkubationstid som användes desto fler celler gick i apoptos. Sedan undersöktes 1,25D3:s effekt vid ER-stress i PC3-celler och först förbehandlades cellerna med 1 µM 1,25D3 i 24 timmar. Därefter behandlades cellerna med 0,1 µg/mL tunicamycin och 1 µM 1,25D3 i 16 timmar för att undersöka genuttrycksförändringen av CYP24A1 och BiP. Resultaten i detta projekt talar för att vitamin D-behandling inte hämmade ER-stress, dvs 1,25D3 inte har någon hämmande effekt för uppkomst av ER-stress inducerad av tunicamycin i de prostatacancer-celler som använts. Intressant är att 1,25D3 inducerar CYP24A1 mRNA även vid ER-stress. Tunicamycin hade ingen effekt på CYP24A1 induktionen.