uu.seUppsala University Publications
Change search
ReferencesLink to record
Permanent link

Direct link
Ersättning av två aminosyror i 9S-dioxygenas-allenoxidsyntas av Colletotrichum graminicola samt förkortning av dioxygenasdomänen för 3D-strukturanalys
Uppsala University, Disciplinary Domain of Medicine and Pharmacy, Faculty of Pharmacy, Department of Pharmaceutical Biosciences.
2015 (Swedish)Independent thesis Advanced level (degree of Master (One Year)), 20 credits / 30 HE creditsStudent thesis
Abstract [sv]

Oxylipiner är oxiderade metaboliter av fleromättade fettsyror. Hos svampar är dessa inblandade i kommunikation, reproduktion, reglering av mykotoxinproduktion och modulering av växtförsvarssystemet vid infektion. Colletotrichum graminicola tillhör de mest kända och viktigaste svampar som orsakar skador på grödor. Genen EFQ_27323 från C. graminicola kodar för 9S-dioxygenas-allenoxidsyntas (9S-DOX-AOS) och vid inkubation med linolsyra bildar hydroperoxyoctadekadiensyra (9-HPODE).

 

Syftet med projektet är dels att ändra kiraliteten av 9S-DOX-AOS i genen EFQ_27323 genom att ersätta aminosyrorna Ile590 och Leu601 mot Gly590 och Phe601, respektive, och dels att förkorta DOX-domänen av enzymet för vidare 3D-strukturanalyser.

 

Site directed mutagenesis används för mutationer av gener genom PCR-tekniken. Mutanten både transformeras och uttrycks i E.coli (BL21) med hjälp av expressionsvektorn pET101D-TOPO. De uttryckta enzymerna inkuberas med linolsyra (18:2n-6) och aktiviteten och dess kiralitet analyseras med hjälp av LC-MS/MS.

 

Ersättningen av Ile590 med Gly590 ändrade kiraliteten av 9S-HPODE till 9R-HPODE med 20 % medan dubbelmutanten, d.v.s. Gly590 och Phe601 ändrade kiraliteten med 58 %. Enzymet förlorar sin 9-HPODE aktivitet när en förkortning av DOX-domän utan CYP-domän genomförs.

 

Specifika aminosyrasubstitutioner i aktivt centrum påverkar regio- och stereoselektiviteten. Aminosyrorna i genen EFQ_27323, Gly590 och Phe601 istället för Ile590 med Leu601 ändrar kiraliteten från 9S-DOX-AOS till 9R-DOX-AOS

Place, publisher, year, edition, pages
2015. , 29 p.
National Category
Medical and Health Sciences Pharmacology and Toxicology
Identifiers
URN: urn:nbn:se:uu:diva-273774OAI: oai:DiVA.org:uu-273774DiVA: diva2:895043
Subject / course
Pharmaceutical Pharmacology
Educational program
Master of Science Programme in Pharmacy
Supervisors
Examiners
Available from: 2016-08-04 Created: 2016-01-18 Last updated: 2016-08-04Bibliographically approved

Open Access in DiVA

No full text

By organisation
Department of Pharmaceutical Biosciences
Medical and Health SciencesPharmacology and Toxicology

Search outside of DiVA

GoogleGoogle Scholar
The number of downloads is the sum of all downloads of full texts. It may include eg previous versions that are now no longer available

Total: 21 hits
ReferencesLink to record
Permanent link

Direct link