uu.seUppsala University Publications
Change search
CiteExportLink to record
Permanent link

Direct link
Cite
Citation style
  • apa
  • ieee
  • modern-language-association
  • vancouver
  • Other style
More styles
Language
  • de-DE
  • en-GB
  • en-US
  • fi-FI
  • nn-NO
  • nn-NB
  • sv-SE
  • Other locale
More languages
Output format
  • html
  • text
  • asciidoc
  • rtf
Ersättning av två aminosyror i 9S-dioxygenas-allenoxidsyntas av Colletotrichum graminicola samt förkortning av dioxygenasdomänen för 3D-strukturanalys
Uppsala University, Disciplinary Domain of Medicine and Pharmacy, Faculty of Pharmacy, Department of Pharmaceutical Biosciences.
2015 (Swedish)Independent thesis Advanced level (degree of Master (One Year)), 20 credits / 30 HE creditsStudent thesis
Abstract [sv]

Oxylipiner är oxiderade metaboliter av fleromättade fettsyror. Hos svampar är dessa inblandade i kommunikation, reproduktion, reglering av mykotoxinproduktion och modulering av växtförsvarssystemet vid infektion. Colletotrichum graminicola tillhör de mest kända och viktigaste svampar som orsakar skador på grödor. Genen EFQ_27323 från C. graminicola kodar för 9S-dioxygenas-allenoxidsyntas (9S-DOX-AOS) och vid inkubation med linolsyra bildar hydroperoxyoctadekadiensyra (9-HPODE).

 

Syftet med projektet är dels att ändra kiraliteten av 9S-DOX-AOS i genen EFQ_27323 genom att ersätta aminosyrorna Ile590 och Leu601 mot Gly590 och Phe601, respektive, och dels att förkorta DOX-domänen av enzymet för vidare 3D-strukturanalyser.

 

Site directed mutagenesis används för mutationer av gener genom PCR-tekniken. Mutanten både transformeras och uttrycks i E.coli (BL21) med hjälp av expressionsvektorn pET101D-TOPO. De uttryckta enzymerna inkuberas med linolsyra (18:2n-6) och aktiviteten och dess kiralitet analyseras med hjälp av LC-MS/MS.

 

Ersättningen av Ile590 med Gly590 ändrade kiraliteten av 9S-HPODE till 9R-HPODE med 20 % medan dubbelmutanten, d.v.s. Gly590 och Phe601 ändrade kiraliteten med 58 %. Enzymet förlorar sin 9-HPODE aktivitet när en förkortning av DOX-domän utan CYP-domän genomförs.

 

Specifika aminosyrasubstitutioner i aktivt centrum påverkar regio- och stereoselektiviteten. Aminosyrorna i genen EFQ_27323, Gly590 och Phe601 istället för Ile590 med Leu601 ändrar kiraliteten från 9S-DOX-AOS till 9R-DOX-AOS

Place, publisher, year, edition, pages
2015. , 29 p.
National Category
Medical and Health Sciences Pharmacology and Toxicology
Identifiers
URN: urn:nbn:se:uu:diva-273774OAI: oai:DiVA.org:uu-273774DiVA: diva2:895043
Subject / course
Pharmaceutical Pharmacology
Educational program
Master of Science Programme in Pharmacy
Supervisors
Examiners
Available from: 2016-08-04 Created: 2016-01-18 Last updated: 2016-08-04Bibliographically approved

Open Access in DiVA

No full text

By organisation
Department of Pharmaceutical Biosciences
Medical and Health SciencesPharmacology and Toxicology

Search outside of DiVA

GoogleGoogle Scholar

Total: 196 hits
CiteExportLink to record
Permanent link

Direct link
Cite
Citation style
  • apa
  • ieee
  • modern-language-association
  • vancouver
  • Other style
More styles
Language
  • de-DE
  • en-GB
  • en-US
  • fi-FI
  • nn-NO
  • nn-NB
  • sv-SE
  • Other locale
More languages
Output format
  • html
  • text
  • asciidoc
  • rtf