uu.seUppsala University Publications
Change search
CiteExportLink to record
Permanent link

Direct link
Cite
Citation style
  • apa
  • ieee
  • modern-language-association
  • vancouver
  • Other style
More styles
Language
  • de-DE
  • en-GB
  • en-US
  • fi-FI
  • nn-NO
  • nn-NB
  • sv-SE
  • Other locale
More languages
Output format
  • html
  • text
  • asciidoc
  • rtf
Ett steg närmare att identifiera den molekylära mekanismen bakom TRPA1 kanalens inneboende förmåga att aktiveras av kyla och kemiska irritanter 
Uppsala University, Disciplinary Domain of Medicine and Pharmacy, Faculty of Pharmacy, Department of Pharmaceutical Biosciences.
2016 (Swedish)Independent thesis Advanced level (degree of Master (One Year)), 20 credits / 30 HE creditsStudent thesis
Abstract [sv]

TRP kanaler (Transient Receptor Potential Channels) är en relativt nyupptäckt superfamilj av jonkanaler indelade i 7 subgrupper där TRPA1 är den enda medlemmen i sin subgrupp. TRPA1 är en icke-selektiv katjonkanal som har förmågan att känna av olika potentiellt vävnadsskadande stimuli såsom kyla och kemiska ämnen. Hos mammalier finns TRPA1 på känselnerver vars aktivering bl.a. leder till smärta och ursprungligen föreslog man att TRPA1 är ett köldkänsligt protein i smärtbanorna. Många senare in vivo och in vitro studier med möss som inte uttrycker TRPA1 (”knock-out” möss) styrker att kanalen kan vara involverad i smärta vid temperaturer under 20 °C. Om detta också gäller hos människa har däremot varit kontroversiellt sedan dess. Syftet med det nuvarande projektet var att renframställa ett trunkerat konstrukt av människans TRPA1 (sA1), efter att ha uttryckts i sf9 insektsceller, för att bättre förstå de molekylära mekanismerna bakom kanalens inneboende förmåga att aktiveras av kyla och kemiska irritanter. För att renframställa sA1, sönderdelades insektceller genom homogenisering följt av solubilisering med hjälp av detergenten fos-choline 14. His-tag specifik affinitetskromatografi IMAC (Immobilized Metal Affinity Chromatografy) användes för att isolera sA1. Det framrenade proteinets koncentration mättes med hjälp av UV-VIS spektrofotometri (NanoDrop 2000c) och renhetsgraden analyserades med SDS-PAGE (sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis). Funktionella studier av sA1 utfördes 1) genom att mäta kalciumflödet via sA1 med hjälp av kalciumindikatorn Fura-2 och 2) med hjälp av patch-clamp elektrofysiologi. Även om våra Fura-2 studier med sA1 uttryckt i insektsceller inte lyckades visa att sA1 är ett funktionellt protein så kunde vi med patch-clamp teknik visa att framrenat sA1 insatt i artificella cellmembran aktiveras när temperaturen sänktes till 15°C. Vår konklusion är att sA1 är köldkänsligt och att vi nu har ett funktionellt protein som kan hjälpa oss att förstå i detalj hur TRPA1 kan reagera på kyla och kemiska irritanter.

Place, publisher, year, edition, pages
2016. , 31 p.
National Category
Medical and Health Sciences
Identifiers
URN: urn:nbn:se:uu:diva-274754OAI: oai:DiVA.org:uu-274754DiVA: diva2:897512
Subject / course
Pharmaceutical Pharmacology
Educational program
Master of Science Programme in Pharmacy
Supervisors
Examiners
Available from: 2016-10-06 Created: 2016-01-25 Last updated: 2016-10-06Bibliographically approved

Open Access in DiVA

No full text

By organisation
Department of Pharmaceutical Biosciences
Medical and Health Sciences

Search outside of DiVA

GoogleGoogle Scholar

urn-nbn

Altmetric score

urn-nbn
Total: 191 hits
CiteExportLink to record
Permanent link

Direct link
Cite
Citation style
  • apa
  • ieee
  • modern-language-association
  • vancouver
  • Other style
More styles
Language
  • de-DE
  • en-GB
  • en-US
  • fi-FI
  • nn-NO
  • nn-NB
  • sv-SE
  • Other locale
More languages
Output format
  • html
  • text
  • asciidoc
  • rtf